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液相色谱柱保养与维护
发布时间:2018-04-02   点击次数:561次

每天用足够的时间来维护色谱柱,您将节省更多用于处理色谱柱故障的时间,同时您的色谱柱的寿命也会变得更长!色谱柱的使用寿命,除了与所分析的样品和流动相及使用频率有关外,zui主要的是与日常的维护密切相关。 色谱柱的使用寿命主要是根据柱效和柱压两个指标来衡量,如果一支色谱柱柱效太低或柱压太高,通常被认为该色谱 柱的使用寿命已经结束。因此,延长色谱柱使用寿命的关 键是,消除引起柱效下降和柱压升高的因素。

  

一、流动相的pH值

   由于硅胶基质的填料中存在Si-C和Si-O键,流动相超过其pH范围将会导致硅胶基质溶解和键合相碳链断裂,使柱效下降,寿命变短。由于流动相的pH控制不当而对色谱柱造成的损害,通常很难使色谱柱恢复,因此必须认真对待,严格控制流动相的pH值。。

二、去除样品和流动相中的固体颗粒

    样品和流动相中含有的固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板,筛板被堵不仅会引起柱压升高,而且也会引起柱效下降,因为筛板的堵塞会引起液流不均,导致色谱峰形拖尾、变宽,甚至出现双峰,从而使柱效下降。因此,建议使用超纯水和色谱纯试剂,在分析前对样品进行超声、针筒过滤,流动相过0.45µm 滤膜,尤其是流动相加入了缓冲盐(如NaH2PO4等),必须过滤。

三、使用保护柱或在线过滤器

    样品和流动相经过滤后并不能完全消除固体颗粒物质,因为泵的磨损、密封圈和管路的老化也会产生固体颗粒物,这些固体颗粒被流动相带入色谱柱,堵塞筛板,导致柱压升高、柱效下降。保护柱和在线过滤器上都有筛板,其孔径与色谱柱筛板孔径相同,因此可以阻止固体颗粒物质到达色谱柱,有效防止色谱柱筛板的堵塞。由于柱压升高在分析故障中占很大比例,因此,除对样品和流动相进行过滤外,建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器。

四、正确使用缓冲盐

    缓冲液可以提供离子平衡的反离子,并使流动相保持一定的离子强度和p H 值,减少拖尾。缓冲盐通常易溶于水,难溶于有机溶剂,因此缓冲盐使用不当会致其析出,堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙,使填料板结,柱压上升;同时阻碍了基质上键合的碳链自由舒展,使色谱柱的保留能力下降,柱效降低。缓冲盐析出后,去除非常困难,因此,正确的使用缓冲盐对延长色谱柱使用寿命非常重要。

正确使用缓冲盐的目的是防止缓冲盐析出,因此正确使用缓冲盐的方法可归结为一句话:使用前要过渡,使用后要冲洗。

具体方法如下:

1.等度条件:使用缓冲盐前用过渡流动相以1.0mL/min   流速冲洗20-30倍柱体积,然后再使用含有缓冲盐的流动相;使用后去除缓冲盐的方法是用过度流动相以1.0mL/min流速冲洗30倍柱体积,然后以纯有机溶液冲洗30倍柱体积保存。

2.梯度条件:用含有缓冲盐的流动相进行梯度洗脱之前,用与初始流动相组成相同的过渡流动相以1.0mL/min流速冲洗30倍柱体积,再开始梯度的运行;分析完成后,再用过渡流动相以1.0mL/min冲洗色谱柱30倍柱体积,然后以纯有机溶液冲洗30倍柱体积保存。

五、另外,在使用缓冲液的过程中还要注意以下几点:

1.避免使用盐酸盐,盐酸盐对钢质有腐蚀作用;

2.缓冲液zui好要现配现用,往往缓冲液是良好的菌类培养液,隔天或放置长时间实验时会发生很多怪现象;

3.使用缓冲液要及时掌握pH范围,做到胸中有数;

4.清洗液路和柱子时,有温控可加热到30摄氏度易于冲洗;

5.长时间用缓冲溶液要注意观察接头处有无析出,若有白色盐类析出,定期用10%硝酸冲洗液路(拆下柱子,冲洗30mL10%硝酸溶液,再用5倍水冲洗)可以避免液路的堵塞;

6.选择缓冲液要用可靠的试剂,避免不纯的盐类造成不必要的麻烦;

过渡流动相是指有机相和水相的组成与分析流动相相同,但是不含缓冲盐的溶液。

六、防止强保留物质在色谱柱中存留

    强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积,对样品中的化合物产生额外的保留行为,不仅引起峰形变宽、拖尾,使柱效下降,同时也会引起保留时间的变化,累积到一定程度时还会导致柱压升高。由于强保留物质和大分子化合物对色谱分离的影响是一个累积效应,需要一定的时间才会体现出来,但对许多样品特别是复杂样品而言,很难判断其是否含有强保留物质,因此要防止强保留物质的累积,需要在每天的日常维护中用纯甲醇或乙腈30倍柱体积清洗色谱柱。

七、色谱柱的再生

1.反相柱

以下列溶剂顺序冲洗30倍柱体积

乙腈-水(5:95) →    四氢呋喃   →   乙腈-水(5:95)

2.正相柱

以下列溶剂顺序冲洗30倍柱体积

正己烷   →  二氯甲烷  →  异丙醇   →  二氯甲烷  →  流动相

3.硅胶柱(Silica)除水

30mL 2.5% 2,2 二甲氧基丙烷和2.5%冰醋酸正己烷溶液冲洗柱子  

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